Sprawozdanie nr 3
Wyznaczanie optymalnego stężenia TTC oraz wyznaczanie toksyczności (test TTC)
BioAut2
· Klaudia Zelga
· Arleta Major
· Weronika Marszałek
· Aleksandra Kukowka
Cel ćwiczeń: Wyznaczanie optymalnego stężenia chlorku 2,3,4-trójfenylotetrazolowego podczas oznaczania aktywności dehydrogenaz za pomocą testu TTC. Wyznaczanie toksyczności za pomocą testu TTC.
Wykonanie, obliczenia i wnioski:
A. Wyznaczanie optymalnego stężenia chlorku 2,3,4-trójfenylotetrazolowego podczas oznaczania aktywności dehydrogenaz za pomocą testu TTC.
Do oznaczonych probówek wirowych wprowadziłyśmy następujące objętość [ml] reagentów:
Reagenty
Probówki (każda próbę robimy podwójnie)
1
2
3
4
5
6
7
8
Roztwór Na2SO3
H20
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,3
0,2
-
Roztwór TTC
0,1
0,4
Osad czynny
Po wprowadzeniu reagentów zawartość probówek wymieszałyśmy, a następnie nasze probówki odłożyłyśmy do inkubacji w ciemności w temperaturze pokojowej na 30 min. Po zakończeniu inkubacji próbki odwirowałyśmy (probówki wirowały się do 3000 obrotów na minutę), następnie odrzuciłyśmy supernatant, a następnie dla przerwania reakcji enzymatycznych i ekstrakcji TF wprowadziłyśmy do próbówek po 4 ml alkoholu metylowego w takiej samej kolejności i zachowując podobne tempo jak przy wprowadzaniu roztworu TTC. Próbki energicznie wytrząsnęłyśmy i ponownie odstawiłyśmy do wirowania. Na samym końcu oznaczyłyśmy ekstynkcję cieczy nadosadowej przy długości fali 485 nm.
Nr probówki
Ekstynkcja
Wartość średnia ekstynkcji
0,743
0,722
0,701
0,822
0,863
0,903
0,341*
0,804
0,680
0,721
0,761
0,611
0,509
peroni69