Metody oznaczania autoAb.pdf

(1108 KB) Pobierz
Metody oznaczania autoAb
METODY OZNACZANIA
PRZECIWCIA
METODY OZNACZANIA
AUTOIMMUNIZACJA
PRZECIWCIAÿ
AUTOLOGICZNYCH
AUTOLOGICZNYCH
ad immunologiczny rozpoznaje
wszystkie
epitopy nawet na kom
nawet na komó rkach w
rkach wł asnych
asnych
CHOROBY
AUTOIMMUNIZACYJNE
CHOROBY
Wię kszo
kszo ść
ść tych komponent
tych komponentó w to potencjalne
w to potencjalne
autoimmunogeny zdolne do wzbudzania
zdolne do wzbudzania
AUTOIMMUNIZACYJNE
odpowiedzi komó rkowej lub humoralnej
rkowej lub humoralnej
Proces tworzenia odpowiedzi immunologicznej
przeciw w
mgr Magdalena Kujawiak
Zakład Laboratoryjnej Immunologii Medycznej
Uniwersytet Medyczny w Łodzi
AUTOIMMUNIZACJA (autoagresja)
W zjawisku autoimmunizacji uczestniczą:
Zespół mechanizmów, dzięki którym mimo
potencjału autoimmunizacyjnego nie dochodzi do
aktywacji komórek autoreaktywnych i do
patologicznej odpowiedzi z niszczeniem struktur
organizmu, nazywamy AUTOTOLERANCJĄ.
- autoantygeny (na prawidłowych komórkach i
wewnątrz nich, rozpoznawane przez limfocyty T i B)
- autoreaktywne limfocyty T
- autoreaktywne limfocyty B
- przeciwciała autologiczne (mogą powodować
niszczenie tkanek i narządów)
Tolerancja immunologiczna jest zabezpieczeniem
przed rozwojem proces
przed rozwojem procesó w
w autoimmunizacyjnych
autoimmunizacyjnych.
MECHANIZMY TOLOERANCJI IMMUNOLOGICZNEJ:
Tolerancja centralna tzw. delecja
delecja centralna
centralna ( elimincja
elimincja
CIĄŻA
autoreaktywnych klon
klonó w limfocyt
w limfocytó w T w grasicy i limfocyt
w T w grasicy i limfocytó w B w
w B w
szpiku kostnym o duż ym powinowactwie do antygen
ym powinowactwie do antygenó w w
w wł asnych)
asnych)
Tolerancja obwodowa : niedopuszczenie do pobudzenia
: niedopuszczenie do pobudzenia
autoreaktywnych limfocyt
limfocytó w T nieusuni
w T nieusunię tych w grasicy lub
tych w grasicy lub
W tym szczególnym okresie układ immunologiczny jest mniej czujny.
zniszczenie tych, któ re uleg
re uległ y aktywacji (do tych reakcji nale
y aktywacji (do tych reakcji nale żą
żą
delecja klonalna
klonalna ,
, apoptoza
apoptoza tych kom
tych komó rek)
rek)
• Nie zwalcza obcych tkanek, np. plemników czy płodu.
= ignorancja antygenu:
- sekwestracja anatomiczna np. ochrona przez szczelny
• Przypuszcza się, że dzięki temu objawy niektórych chorób (np. RZS -
reumatoidalnego zapalenia stawów) łagodnieją, a innych (np. tocznia)
nasilają się.
sekwestracja anatomiczna np. ochrona przez szczelny
śró db
sekwestracja molekularna ( „-” produkcja
produkcja cytokin
cytokin IFN, TNF)
IFN, TNF)
• Prawdopodobnie to skutek interakcji, jakie zachodzą między
hormonami płciowymi (estrogenami i progesteronem) a tzw. limfocytami
T oraz wahań stężenia tych komórek we krwi, do jakich dochodzi w
różnych okresach ciąży
Aktywna supresja
supresja : kom
: komó rki T regulatorowe ( tzw.
rki T regulatorowe ( tzw. supresorowe
supresorowe ),
),
tworzą IL
IL- 10, TGF
10, TGF-B
1
Nasz ukł ad immunologiczny rozpoznaje
Û Nasz uk
wszystkie epitopy
Û Wi
autoimmunogeny
odpowiedzi kom
Û Proces tworzenia odpowiedzi immunologicznej
przeciw wł asnym antygenom to
asnym antygenom to
AUTOIMMUNIZACJA (autoagresja)
Tolerancja immunologiczna jest zabezpieczeniem
  Tolerancja centralna tzw.
autoreaktywnych
szpiku kostnym o du
  Tolerancja obwodowa
autoreaktywnych
zniszczenie tych, kt
delecja
Sekwestracja = ignorancja antygenu:
  Sekwestracja
onek
- sekwestracja molekularna (
dbł onek
  Aktywna
tworz
115244143.074.png 115244143.085.png 115244143.096.png 115244143.107.png 115244143.001.png 115244143.012.png 115244143.023.png 115244143.027.png 115244143.028.png 115244143.029.png 115244143.030.png 115244143.031.png 115244143.032.png 115244143.033.png 115244143.034.png 115244143.035.png 115244143.036.png 115244143.037.png 115244143.038.png 115244143.039.png
amania tolerancji immunologicznej rozwija się
choroba autoimmunizacyjna , b
, będą ca stanem
Choroby autoimmunizacyjne
autoimmunizacyjne uk
ukł adowe (narz
adowe (narzą dowo
dowo-
rym dochodzi do zaatakowania struktur
organizmu i niszczenia ich w procesie nieprawid
nieswoiste) to choroby przewlek
to choroby przewlekł e, do kt
e, do któ rych
rych
organizmu i niszczenia ich w procesie nieprawidł owo
owo
zaliczamy:
przebiegają cej odpowiedzi immunologicznej.
cej odpowiedzi immunologicznej.
- choroby reumatyczne
choroby reumatyczne tj. reumatoidalne zapalenie
tj. reumatoidalne zapalenie
stawó w, m
w, mł odzie
odzień cze zapalenie staw
cze zapalenie stawó w, tocze
w, toczeń
Przykłady chorób autoimmunologicznych:
celiakia
cukrzyca typu 1
toczeń układowy
zespół Sjögrena
stwardnienie rozsiane
choroba Hashimoto
choroba Graves-Basedowa
trombocytopenia samoistna
reumatoidalne zapalenie stawów
ukł adowy, zesp
adowy, zespół Sjoegrena
Sjoegrena ,
, twardzina
twardzina ograniczona i
ograniczona i
ukł adowa, zapalenie
adowa, zapalenie wielomi
wielomi ęś
ęś niowe
niowe /sk
/skó rno
rno- mi
mi ęś
ęś niowe,
niowe,
zespół antyfosfolipidowy
antyfosfolipidowy
- zapalenia naczy
zapalenia naczyń tj. mikroskopowe zapalenie
tj. mikroskopowe zapalenie
naczyń , guzkowe zapalenie t
, guzkowe zapalenie tę tnic, zesp
tnic, zespół Kawasaki
Kawasaki ,
,
ziarniniak Wegenera
Wegenera
REUMATOIDALNE ZAPALENIE STAWÓW (RZS) = gościec
Choroba Hashimoto, Graves-Basedowa, nowotwory tarczycy
  przeciwciała anty TG (przeciwciała przeciw tyreoglobulinie)
  uszkadzają komórki tarczycy na drodze zależnej od przeciwciał
cytotoksyczności komórkowej.
- przewlekła choroba zapalna
- rozpoczyna się od zapalenia błony maziowej stawu i prowadzi do
zapalenia stawów, kaletek maziowych i pochewek ścięgnistych
- w przebiegu przewlekłego stanu zapalnego błona maziowa ulega
pogrubieniu oraz tworzy liczne fałdy. Dochodzi do niszczenia
chrząstki, torebki stawowej, więzadeł i trwałego zniekształcenia
stawów
- mogą występować objawy ze strony innych narządów
- należy do układowych chorób tkanki łącznej
- określono predyspozycję genetyczną
- powstają m.in. autoprzeciwciała przeciw fragmentowi FcIgG,
- dochodzi do uwolnienia enzymów agresywnych wobec chrząstki
stawowej (kolagenazy, elastazy)
Cukrzyca typu I
  najczęstszą z chorób autoimmunologicznych
  dotyka 1 na 20 osób
  celem ataku są komórki trzustki produkujące insulinę
Stwardnienie rozsiane (SM)
  choruje jedna na tysiąc osób, trzy razy częściej kobiety
  układ odpornościowy uznaje za wroga mózg i rdzeń kręgowy,
niszczy osłonki włókien nerwowych, a w ich miejscu tworzy się
stwardnienie (blizna)
TOCZEŃ UKŁADOWY RUMIENIOWATY
(systemic lupus erythematosus - SLE)
Do czynników etiologicznych zaliczamy :
-
- rozwija się na tle złożonych i niejasnych zaburzeń układu odpornościowego,
prowadzacych do procesu zapalnego wielu tkanek i narządów
- zachorowalność szacuje się na 40–50 przypadków na 100tys.
- 10-krotnie częściej chorują kobiety i szczyt zachorowań występuje w wieku
16–55 lat
- przez dłuższy czas mogą dominować objawy z jednego narządu, a w miarę
trwania choroby mogą pojawiać się objawy z kolejnych narządów
- zwykle wykrywa się:
• Ab przeciw dsDNA (natywne
DNA)
• Ab anty-Sm
• Ab przeciwjądrowe (ANA)
predyspozycje genetyczne (haplotypy HLA kl. I i II: A1,
B8, B27, DR1, DR2, DR3, DQw1, DQw6 )
-
czynniki środowiskowe (infekcje wirusowe, bakteryjne,
leki, oleje toksyczne)
DIAGNOSTYKA LABORATORYJNA:
I. badanie ogólne krwi, OB, CRP, stężenie w surowicy
składowych dopełniacza C3, C4 i ich produktów C3d, a
także poziom IgG w surowicy
II. oznaczanie w materiale z biopsji kompleksów, złogów
immunologicznych
2
W momencie za
W momencie zał amania tolerancji immunologicznej rozwija si
ca stanem
Choroby
nieswoiste)
patologicznym, w kt
patologicznym, w któ rym dochodzi do zaatakowania struktur
przebiegaj
staw
uk
uk
zesp
naczy
ziarniniak
115244143.040.png 115244143.041.png 115244143.042.png 115244143.043.png 115244143.044.png 115244143.045.png 115244143.046.png 115244143.047.png 115244143.048.png 115244143.049.png 115244143.050.png 115244143.051.png 115244143.052.png 115244143.053.png 115244143.054.png 115244143.055.png 115244143.056.png 115244143.057.png 115244143.058.png 115244143.059.png 115244143.060.png 115244143.061.png 115244143.062.png 115244143.063.png 115244143.064.png
III. Oznaczanie autoprzeciwciał w surowicy krwi
skierowane przeciwko:
¦ antygenom powszechnie wyst
mogą by
być skierowane przeciwko:
1. Badanie screeningowe, wstępne, podstawowe,
przesiewowe, metodą immunofluorescencji
pośredniej
- Ocena jakościowa obecności autoprzeciwciał i
zaszeregowanie ich do określonego rodzaju
antygenom powszechnie wystę puj
pują cym w organizmie
cym w organizmie
gospodarza w tkankach i narzadach
narzadach (Ag j
(Ag ją drowe
drowe-
DNA, histony
histony , RNA)
, RNA)
¦ antygenom swoistym tylko dla okre
antygenom swoistym tylko dla okreś lonej tkanki (Ag
lonej tkanki (Ag
2. Badanie potwierdzające, metodą blot lub ELISA
- Ocena jakiściowa pozwalająca określić swoistość
autoprzeciwciał
tarczycowy- tyreoglobina
tyreoglobina)
Najważniejsze badanie dodatkowe w diagnostyce chorób
autoimmunizacyjnych, gdzie dominuje odpowiedź
humoralna
3. Badanie ilościowe, metodą ELISA
- Oznaczanie ważne w monitorowaniu przebiegu choroby
np. tocznia układowego (Ab anty-dsDNA)
TECHNIKĘ IIF WYKORZYSTUJE SI
IIF WYKORZYSTUJE SIĘ DO OZNACZANIA:
DO OZNACZANIA:
- przeciwcia
przeciwciał przeciwj
przeciwją drowych
drowych (ANA)
(ANA)
- przeciwcia
przeciwciał przeciwneutrofilowych
przeciwneutrofilowych (ANCA)
(ANCA)
- przeciwcia
przeciwciał przeciwsercowych
przeciwsercowych (AHA)
(AHA)
- przeciwcia
przeciwciał przeciwmitochondrialnych
przeciwmitochondrialnych (AMA)
(AMA)
- przeciwcia
przeciwciał przeciwko mi
przeciwko mi ęś
ęś niom g
niom gł adki
adki m (ASMA)
m (ASMA)
- wą trobowo
trobowo- nerkowych Ab
nerkowych Ab przeciwmikrosomalnych
przeciwmikrosomalnych (anty
(anty- LKM
LKM- 1)
1)
- przeciwcia
przeciwciał przeciwko rozpuszczalnym antygenom w
przeciwko rozpuszczalnym antygenom wą troby
troby
SLA)
- przeciwcia
(anty- SLA)
przeciwciał reaguj
reagują cych z antygenami w
cych z antygenami wą troby i trzustki (LP)
troby i trzustki (LP)
- przeciwcia
przeciwciał a przeciwko w
a przeciwko wą trobowo
trobowo- specyficznym antygenom
specyficznym antygenom
onowym (anty
onowym (anty- LSP)
LSP)
METODY
IMMUNOFLUORESCENCYJNE
METODY
- przeciwcia
przeciwciał przeciwko receptorowi
przeciwko receptorowi asialoglikoproteinowemu
asialoglikoproteinowemu
ASGPR)
- przeciwcia
(anty- ASGPR)
(anty
IMMUNOFLUORESCENCYJNE
przeciwciał a przeciwko dehydrogenazie alkoholowej (ADH)
a przeciwko dehydrogenazie alkoholowej (ADH) - u
u
dzieci
IMMUNOFLUORESCENCJA
PRZYGOTOWANIE MATERIAŁ U DO BADA
U DO BADAŃ
Zastosowana pierwszy raz w latach 40’ XX wieku
XX wieku
Technika immunofluorescencyjna
immunofluorescencyjna nie
nie
do wykrywania Ag pneumokokowego
pneumokokowego w tkankach.
w tkankach.
wymaga utrwalania materiał u,
u,
y,
przygotowywany do dalszej procedury
materiał ś wie
wież y,
przygotowywany do dalszej procedury
jedynie przez zamra
Do dziś to warto
to wartoś ciowa metoda diagnostyczna w
ciowa metoda diagnostyczna w
jedynie przez zamraż anie.
anie.
chorobach o podłoż u immunologicznym. Charakteryzuje
u immunologicznym. Charakteryzuje
się wysok
wysoką czu
czułoś ci
cią i swoisto
i swoistoś ci
cią.
Istotą reakcji jest wi
reakcji jest wią zanie Ag z
zanie Ag z Ab
Ab wyznakowanym
wyznakowanym
fluorochromem.
ciej stanowią
wycinki tkankowe, pobrane podczas
do badań najcz
najcz ęś
ęś ciej stanowi
wycinki tkankowe, pobrane podczas
biopsji, rzadziej rozmazy z
liwia uwidocznienie poszukiwanych Ag w skrawkach
tkankowych oceniaj
biopsji, rzadziej rozmazy z aspiratu
aspiratu
pobranego drogą punkcji
punkcji cienkoig
cienkoigł owej
owej .
.
tkankowych oceniają c je w mikroskopie fluorescencyjnym,
c je w mikroskopie fluorescencyjnym,
posiadają cym specjalne filtry przepuszczaj
cym specjalne filtry przepuszczają ce wi
ce wią zk
zkę
wiatł a niezb
a niezbę dna do wzbudzenia
dna do wzbudzenia fluorochromu
fluorochromu .
.
3
Autoprzeciwcia
Autoprzeciwciała mog
gospodarza w tkankach i
DNA,
tarczycowy
TECHNIK
(anty
PRZYGOTOWANIE MATERIA
Û Zastosowana pierwszy raz w latach 40
Û Technika
wymaga utrwalania materia
do wykrywania Ag
opracowuje si
opracowuje się materia
Û Do dzi
chorobach o pod
si
Û Istot
Û Materia
Materiał do bada
fluorochromem
Û To umo
To umoż liwia uwidocznienie poszukiwanych Ag w skrawkach
pobranego drog
posiadaj
ś wiat
115244143.065.png 115244143.066.png 115244143.067.png 115244143.068.png 115244143.069.png 115244143.070.png 115244143.071.png 115244143.072.png 115244143.073.png 115244143.075.png 115244143.076.png 115244143.077.png 115244143.078.png 115244143.079.png 115244143.080.png 115244143.081.png 115244143.082.png 115244143.083.png 115244143.084.png 115244143.086.png
POSTĘ POWANIE Z MATERIA
POWANIE Z MATERIAŁ EM TKANKOWYM
EM TKANKOWYM
NIEUTRWALONYM
EM
TKANKOWYM NIEUTRWALONYM
POWANIE Z MATERIAŁ EM
NIEUTRWALONYM
TKANKOWYM NIEUTRWALONYM
1.
1.
Bioptat /wycinek umieszcza si
/wycinek umieszcza się na
na
stoliku kriostatu tj. mikrotonu
mikrotonu , kt
, któ ry
ry
Skrawki wykonuje się po uprzednim po
po uprzednim położ eniu
eniu bioptatu
bioptatu w uchwycie i
w uchwycie i
po łą
łą czony jest z zamra
czony jest z zamraż ark
arką ,
,
odczekaniu kilkunastu minut.
na uzyskanie
temperatury przynajmniej
temperatury przynajmniej - 20
20 ° C.
C.
Skrawki o gruboś ci ok. 4
ci ok. 4- 6 mikron
6 mikronó w umieszcza si
w umieszcza się na szkie
na szkieł kach
kach
podstawowych pokrytych substancją zabezpieczaj
zabezpieczającą przed
przed
2.
2.
Tkankę pokrywa si
pokrywa się specjalnym
specjalnym
odklejeniem i utrwala mieszaniną alkoholu z acetonem.
alkoholu z acetonem.
ynem o duż ej g
ej gę sto
stoś ci (
ci ( Tissue
Tissue- Tek
Tek )
)
a nastę pnie zamra
pnie zamraż a tzw. mieszanin
a tzw. mieszaniną
Owinię te foli
te folią aluminiow
aluminiową szkie
szkieł ka mo
ka moż na przechowywa
na przechowywać w temp.
w temp.- 20
20 ° C
C
zamraż aj
ającą (aceton, suchy l
(aceton, suchy ló d, ciek
d, ciekł y
y
zamra
nawet do pół roku.
roku.
azot) oraz pł ynem ozi
ynem ozię biaj
biają cym. Takie
cym. Takie
enie chroni
przed zniszczeniem struktury tkanki.
przed zniszczeniem struktury tkanki.
3.
3.
Tak przygotowany materiał mo
moż na
na
przechowywać w zamra
w zamraż arce w temp.
arce w temp.
70 ° C przez wiele miesi
C przez wiele miesię cy.
cy.
Û Stosuje si
Stosuje się dwa warianty
dwa warianty metody immunofluorescencji (IF):
metody immunofluorescencji (IF):
KONTROLE
Testy
przy pomocy
znakowanych fluorescencyjnie przeciwcia
IF bezpoś rednie
rednie wykrywaj
wykrywają przy pomocy
znakowanych fluorescencyjnie przeciwciał okre
okreś lony antygen.
lony antygen.
Û Nale
Należ y pami
y pamię ta
tać o
o autofluorescencji
autofluorescencji kom
komó rek (nieswoiste
rek (nieswoiste
ś wiecenie).
wiecenie).
Testy
Testy IF po
IF poś rednie
rednie wykrywaj
wykrywają przy pomocy znakowanych
przy pomocy znakowanych
fluorescencyjnie przeciwciał immunoglobuliny, kt
immunoglobuliny, któ re
re
Û W kontroli negatywnej zamiast Ab podczas wykonywania
W kontroli negatywnej zamiast Ab podczas wykonywania
badania dodaje si
uprzednio zwią za
zał y si
y się ze swoistym antygenem.
ze swoistym antygenem.
badania dodaje się surowic
surowicę normaln
normalną ,
, zwi
zwię rz
rzęcą.
Û Trzeba tak
Trzeba takż e wykona
e wykonać kontrol
kontrolę pozytywn
pozytywną w tkance o
w tkance o
znanej ekspresji Ag.
Û Prawid
owo wykonane kontrole (dodatnia i ujemna)
zmniejszaj
zmniejszają prawdopodobie
prawdopodobień stwo uzyskania wynik
stwo uzyskania wynikó w
w
fał szywie dodatnich i fa
szywie dodatnich i fał szywie ujemnych.
szywie ujemnych.
METODA IMMUNOFLUORESCENCJI
BEZPO
METODA IMMUNOFLUORESCENCJI
METODA IMMUNOFLUORESCENCJI
PO
BEZPOŚ REDNIEJ
REDNIEJ
POŚ REDNIEJ
REDNIEJ
direct immunofluorescence
immunofluorescence - DIF)
DIF)
( indirect
indirect immunofluorescence
immunofluorescence - IIF)
IIF)
jednostopniowa, najprostsza
Û prowadzimy tylko jedn
Dwustopniowa:
1 faza
skrawka z wyznakowanym
fluorochromem Ab skierowanym przeciwko konkretnemu Ag
inkubację skrawka z wyznakowanym
1 faza- wi
wią zanie
zanie nieznakowanego
nieznakowanego Ab z
Ab z
fluorochromem Ab skierowanym przeciwko konkretnemu Ag
Û oceniamy pod mikroskopem fluorescencyjnym czy jest
poszukiwanym Ag
2 faza
oceniamy pod mikroskopem fluorescencyjnym czy jest ś wiecenie
wiecenie
2 faza- wi
wią zanie Ab znakowanego (Ab wt
zanie Ab znakowanego (Ab wtó rnego)
rnego)
(barwa zależ nie od rodzaju
nie od rodzaju fluorochromu
fluorochromu ), czyli czy w skrawku obecne
), czyli czy w skrawku obecne
z Ab nieznakowanym
nieznakowanym (Ab pierwotnym), kt
(Ab pierwotnym), któ re
re
poszukiwane Ag
Û stosowana do wykrywania Ag wirusowych, bakteryjnych,
uprzednio zd ąż
ążył o ju
o już zwi
zwią za
zać si
się z Ag
z Ag
stosowana do wykrywania Ag wirusowych, bakteryjnych,
paso
pasoż ytniczych i nowotworowych
ytniczych i nowotworowych
liwia wzmocnienie reakcji
immunologicznej, co pozwala na zmniejszenie t
immunologicznej, co pozwala na zmniejszenie tł a
a
reakcji a dzię ki temu otrzymanie czytelniejszego
ki temu otrzymanie czytelniejszego
obrazu.
Û Stosowana do wykrywania
Stosowana do wykrywania Ab
Ab.
Preparaty: np. skrawki wą troby/serca szczura,
troby/serca szczura,
utrwalone komó rki Hep
rki Hep- 2 (kom
2 (komó rki raka krtani
rki raka krtani
bogate w antygeny)
4
POST
POST
POSTĘ POWANIE Z MATERIA
Bioptat
Û Skrawki wykonuje si
stoliku kriostatu tj.
po
pozwalaj
pozwalającą na uzyskanie
Û Skrawki o grubo
podstawowych pokrytych substancj
Tkank
odklejeniem i utrwala mieszanin
ynem o du
a nast
Û Owini
nawet do p
azot) oraz p
yskawiczne zamro
yskawiczne zamroż enie chroni
Tak przygotowany materia
przechowywa
- 70
KONTROLE
Testy IF bezpo
fluorescencyjnie przeciwcia
uprzednio zwi
Prawidł owo wykonane kontrole (dodatnia i ujemna)
fa
METODA IMMUNOFLUORESCENCJI
( direct
Û jednostopniowa, najprostsza
Û Dwustopniowa:
prowadzimy tylko jedną inkubacj
poszukiwanym Ag
(barwa zale
z Ab
poszukiwane Ag
uprzednio zd
Û Metoda ta umo
Metoda ta umoż liwia wzmocnienie reakcji
reakcji a dzi
obrazu.
Û Preparaty: np. skrawki w
utrwalone kom
115244143.087.png 115244143.088.png 115244143.089.png 115244143.090.png 115244143.091.png 115244143.092.png 115244143.093.png 115244143.094.png 115244143.095.png 115244143.097.png 115244143.098.png 115244143.099.png 115244143.100.png 115244143.101.png 115244143.102.png 115244143.103.png 115244143.104.png 115244143.105.png 115244143.106.png 115244143.108.png 115244143.109.png 115244143.110.png 115244143.111.png 115244143.112.png 115244143.113.png 115244143.114.png
PODSTAWOWE TYPY ŚWIECENIA w metodzie IF
POŚREDNIEJ OZNACZANIA PRZECIWCIAŁ
anty- JĄDROWYCH:
Pośrednia immunoflorescencja
Wzory barwienia immunofluorescencyjnego w diagnostyce przeciwciał
przeciwjądrowych
• Homogenny
• Brzeżny
• Plamisty
• Jąderkowy
obwodowa
homogenna
Typy pośrednie :
• Centromerowy
• Drobnoplamisty
• Homogenno-brzeżny
centromerowa
jąderkowa
plamista
COLORZYME
METODYKA DWUBARWNA I TRÓ JBARWNA
JBARWNA
Û pochodna metody
pochodna metody immunofluorescencyjnej
immunofluorescencyjnej , w kt
, w któ rej wyeliminowano
rej wyeliminowano
liwia wykrycie kilku Ag w jednym skrawku
Û stosuje si
konieczno ść
ść stosowania
stosowania ś wiat
wiatł a UV
a UV
stosuje się Ab znakowane r
Ab znakowane róż nymi
nymi fluorochromami
fluorochromami o odmiennych
o odmiennych
barwach
Û wykorzystywana g
Û stosuje si
stosuje się konjugaty
konjugaty antyglobulin
antyglobulin z
z peroksydaz
peroksydazą chrzanow
chrzanową (HRP)
(HRP)
wykorzystywana głó wnie w technice immunofluorescencji po
wnie w technice immunofluorescencji poś redniej
redniej
oraz nowych substrató w, co umo
w, co umoż liwi
liwił o zwi
o zwię kszenie dok
kszenie dokł adno
adnoś ci
ci
szczegółó w struktury kom
w struktury komó rkowej na obrazie mikroskopowym
rkowej na obrazie mikroskopowym
ANCA ( Anti
Anti- Neutrophil
Neutrophil Cell
Cell Antibody
Antibody)
ANCA c.d.
W wielu chorobach tj. ziarniniak Wegenera
Wegenera , guzkowe zapalenie naczy
, guzkowe zapalenie naczyń ,
,
Zależ nie od typu
nie od typu ś wiecenia mo
wiecenia moż na wyr
na wyróż ni
nić:
choroba Kawasaki
Kawasaki , opisane zosta
, opisane został y przeciwcia
y przeciwciał a skierowane przeciwko
a skierowane przeciwko
C- ANCA
ANCA cytoplazmatyczny, anty
cytoplazmatyczny, anty- PR
PR-3
śró db
dbł onkom naczy
onkom naczyń.
MPO (MPO ma dodatni
ł adunek, a podczas utrwalania alkoholem zostaje uwolniona z
P- ANCA
ANCA oko
okoł oj
oją drowy
drowy , anty
, anty- MPO (MPO ma dodatni
adunek, a podczas utrwalania alkoholem zostaje uwolniona z
granul do cytoplazmy i przyci
Nie jest znany antygen przeciw któ remu Ab powstaj
remu Ab powstają , jako
, jako
granul do cytoplazmy i przycią gana do j
gana do ją dra kom
dra komó rki, kt
rki, któ rego
rego
prawdopodobne uważ a si
a się zmodyfikowane, nieprawid
zmodyfikowane, nieprawidł owe cz
owe czą steczki
steczki
DNA ma ł adunek ujemny)
adunek ujemny)
adhezyjne wystę puj
pują ce na powierzchni kom
ce na powierzchni komó rek
rek śró db
dbł onka
onka
A- ANCA
ANCA atypowy
atypowy
naczyniowego.
Te Ab mogą aktywowa
aktywować uk
ukł ad dope
ad dopeł niacza oraz bra
niacza oraz brać udzia
udział w procesie
w procesie
ADCC (cytotoksyczno ść
ść zale
zależ na od przeciwcia
na od przeciwciał ).
).
U pacjentó w z niekt
w z niektó rymi postaciami zapalenia ma
rymi postaciami zapalenia mał ych naczy
ych naczyń wykry
wykryć
na:
- Ab anty
Ab anty- proteinaza3 (PR
proteinaza3 (PR- 3) granulocyt
3) granulocytów
Ab anty
anty- mieloperoksydaza
mieloperoksydaza (MPO) granulocyt
(MPO) granulocytów
5
METODYKA DWUBARWNA I TR
Û umo
umoż liwia wykrycie kilku Ag w jednym skrawku
konieczno
barwach
oraz nowych substrat
szczeg
ANCA c.d.
ANCA (
Û W wielu chorobach tj. ziarniniak
Û Zale
choroba
Û Nie jest znany antygen przeciw kt
DNA ma
prawdopodobne uwa
adhezyjne wyst
naczyniowego.
Û Te Ab mog
ADCC (cytotoksyczno
Û U pacjent
mo
moż na:
- Ab
115244143.115.png 115244143.116.png 115244143.117.png 115244143.002.png 115244143.003.png 115244143.004.png 115244143.005.png 115244143.006.png 115244143.007.png 115244143.008.png 115244143.009.png 115244143.010.png 115244143.011.png 115244143.013.png 115244143.014.png 115244143.015.png 115244143.016.png 115244143.017.png 115244143.018.png 115244143.019.png 115244143.020.png 115244143.021.png 115244143.022.png 115244143.024.png 115244143.025.png 115244143.026.png
Zgłoś jeśli naruszono regulamin