BIOTOKSYNY MORSKIE - WYSTĘPOWANIE I METODY ANALIZY.pdf

(129 KB) Pobierz
02_Michalski
YWNO . Nauka. Technologia. Jako , 2006, 3 (48), 16 - 22
MIROSŁAW M. MICHALSKI
BIOTOKSYNY MORSKIE - WYST POWANIE I METODY ANALIZY
S t r e s z c z e n i e
W pracy scharakteryzowano 5 grup biotoksyn morskich wyst puj cych w mał ach blaszkoskrzelnych
(dwuskorupkowych) mog cych by przyczyn zatru po ich spo yciu. Nale do nich toksyny
parali uj ce -PSP, wywołuj ce biegunk - DSP i AZP, zaburzenia nerwowe - NSP i zaburzenia pami ci -
ASP. Spo ywanie mał , ostryg i omułków staje si w Polsce coraz popularniejsze, a wi c i
prawdopodobie stwo zatru po spo yciu mał wzrasta. Wskazano ródła toksyn morskich, metody ich
wykrywania oraz podstawowe akty prawne zwi zanie z hodowl , dystrybucj i nadzorem nad mał ami
przeznaczonymi do konsumpcji przez ludzi.
Słowa kluczowe: mał e dwuskorupkowe, plankton, toksyny morskie, zatrucia
Wprowadzenie
Mikroskopijne algi (plankton) s w oceanach podstawowym ródłem po ywienia
dla mi czaków, takich jak: ostrygi, mał e, przegrzebki czy te omułki oraz dla larw
skorupiaków. W ród około 5000 istniej cych gatunków alg morskich około 300 mo e
wyst powa w bardzo du ej ilo ci, powoduj c tzw. kwitnienie wody poł czone ze
zmian zabarwienia powierzchni wód i to zarówno słonych, jak i słodkich. Kwitnienie
wód nosi równie nazw "red tides" czyli czerwony przypływ, chocia nie zawsze
wody zabarwiaj si na czerwono. Wody zabarwiaj si równie na kolor ółty,
zielony, br zowy lub niebieski w zale no ci od rodzaju planktonu, jego ilo ci i
gł boko ci na jakiej wyst puje. Plankton mo e wytworzy zwi zki toksyczne dla
ludzi, zwłaszcza w czasie tzw. "kwitnienia wód" wytwarza si szczególnie du o
ró norodnych toksyn [7, 10]. W ostatnich latach cz stotliwo wyst powania
kwitnienia alg znacznie si zwi kszyła. Przyczyny tej ekspansji nie s do ko ca
poznane. Wydaje si , e wpływ zanieczyszczenia rodowiska substancjami
mineralnymi, cieki przemysłowe, podniesienie si temperatury wód przybrze nych
Dr in . M.M. Michalski, Pa stwowy Instytut Weterynaryjny – Pa stwowy Instytut Badawczy, Al.
Partyzantów 57, 24-100 Puławy
BIOTOKSYNY MORSKIE - WYST POWANIE I METODY ANALIZY
17
wpływa znacznie na okresowy i gwałtowny rozwój jednokomórkowców. Równie
zmiany klimatyczne i zakłócenia hydrograficzne maj wpływ na ich rozwój. Jednak
okresów i miejsc wyst powania nadmiernych ilo ci planktonu nie mo na dzisiaj
przewidzie [1, 14].
Termin „morskie biotoksyny” oznacza substancje toksyczne odkładaj ce si
w ywych mał ach, zwłaszcza wskutek spo ywania przez nie planktonu zawieraj cego
toksyny. Substancje toksyczne przedostaj si do organizmu mi czaków poprzez
plankton jako ich po ywienie i kumulowane s w mi niach i w trobotrzustce.
Biotoksyny morskie wytwarzane s przez glony planktonowe, gdy wyst pi korzystne
warunki do ich rozwoju tj. dost pno substancji organicznej, dost pno
mikroelementów, O 2 /CO 2 , obecno wiatła, odpowiednia temperatura wody czy te
zmiana zasolenia spowodowana pr dami morskimi. Glony przenoszone s przez pr dy
morskie do miejsc bogatych w substancje od ywcze i w kierunku powierzchni, do
wiatła.
Coraz wi ksz popularno ci w naszym kraju ciesz si tzw. „owoce morza”,
w tym mał e blaszkoskrzelne (mi czaki). W krajach, takich jak: Hiszpania, Francja,
Portugalia, USA czy Japonia owoce morza s spo ywane bardzo powszechnie, co
wi e si ze zwi kszonym ryzykiem zatru po spo ycia mał zawieraj cych
biotoksyny. Aby unikn przedostania si "ska onych" mał do obrotu stosuje si
szereg procedur zabezpieczaj cych, pocz wszy od nadzoru nad obszarami
produkcyjnymi po gotowy produkt.
Nadzór nad obszarem produkcji polega na monitorowaniu obecno ci glonów na
ró nych gł boko ciach, okre laniu gatunku i ilo ci fitoplanktonu/glonów oraz
obecno ci składników od ywczych (azotany(V), azotany(III), amoniak, fosforany(V),
krzemiany) w rodowisku. Monitorowaniu podlega równie woda, któr bada si na
obecno metali, pestycydów, zwi zków chloroorganicznych, dokonuje si pomiaru
temperatury i stopnia zasolenia, pH, oznacza si zawarto tlenu rozpuszczonego w
wodzie, jej przejrzysto itd. Kolejnymi etapami nadzoru jest oznaczanie obecno ci
biotoksyn w glonach, biotoksyn w mi czakach i badania mikrobiologiczne obszaru
produkcyjnego. Otrzymane dane pozwalaj dokona klasyfikacji obszarów
produkcyjnych, tzn. dopuszczenie do zbioru mał i przekazanie do handlu lub do
zakładów oczyszczania, gdzie toksyny s wymywane z mał blaszkoskrzelnych
(dwuskorupkowych) czyst wod . Proces wymywania w zale no ci od rodzaju mał y i
toksyny trwa od kilku dni do kilkunastu tygodni.
Charakterystyka biotoksyn morskich
Główne biotoksyny spotykane w mi czakach (s hellfish marine biotoxins) to: PSP
– parali uj ce, NSP – neurotoksyny, ASP – anamnestyczne, DSP - wywołuj ca
biegunki oraz AZA (kwas azaspirowy) wywołuj cy biegunki.
18
Mirosław M. Michalski
Toksyna paralityczna - PSP – (Paralitic Shellfish Poisoning)
Toksyny paralityczne s najbardziej niebezpieczne dla człowieka i stanowi du y
problem w krajach, gdzie spo ywanie mał jest powszechne. I to zarówno tych
pochodz cych z hodowli, jak i zbieranych indywidualnie na wybrze u morza. Aktywn
toksyn jest saksytoksyna (STX) oraz jej 21 izomerów (pochodne tetrahydropuryn,
SXT's). W 1975 r. po raz pierwszy uzyskano krystaliczn syntetyczn pochodn
saksytoksyny i zbadano jej struktur [4]. Minimalna dawka saksytoksyny powoduj ca
zatrucie to 20 mg/kg masy ciała. Dawka miertelna dla człowieka to 150 mg/kg masy
ciała. Dopuszczalna zawarto PSP wynosi 80 mg/100 g mi sa mi czaków. Pierwsze
udokumentowane zatrucie wyst piło w 1948 r. w Japonii, a w USA w połowie lat 60.
XX w. W Europie notowane s zatrucia od wczesnych lat 80. Pod koniec 1987 r. w
Wielkiej Brytanii wiele osób zatruło si PSP, a 3 osoby zmarły. Pierwotnym ródłem
SXT's s glony z rodzaju Alexandrium , a wi c np . A. catenella, A. tamarensis, A.
minutum, A. fundyense i A. cohorticula. Równie ródłem STX's s Pyrodinium
bahamense i Gymnodinum catenatum [12]. Podczas zakwitu Pyrodinium w 1987 r. w
Gwatemali, w wyniku spo ycia toksycznych mał , 187 osób było hospitalizowanych, a
26 osób zmarło . Równie kraby, limaki morskie i krewetki mog zawiera PSP.
Objawy zatrucia saksytoksyn to: dr twienia j zyka, brak czucia, pora enie mi ni
oddechowych i układu motorycznego, pora enie układu sercowo-naczyniowego,
dr enie r k i palców u nóg, bełkotliwa mowa, linienie si i kłopoty z oddychaniem.
miertelno wynosi około 10%. Do metod wykrywania nale y test na myszach
(MBA) (metoda referencyjna) lub na szczurach (RBA) i metody alternatywne tj. Elisa
(immunoassay), HPLC, LC-MS, LC, chromatografia jonowymienna, elektroforeza,
okre lenie stopnia blokowania kanałów sodowych (mous e in vitro ) czy te techniki
elektroforetyczne.
Toksyny wywołuj ce biegunk – DSP (Diarrhetic Shellfish Poisoning) i AZP
(Azaspiracid Shellfish Poisoning)
DSP nale do toksyn lipofilnych, gromadz cych si w tkance tłuszczowej
mi czaków. Toksyny s termostabilne. Minimalna dawka toksyny powoduj ca
biegunk to 40 mg. Objawami zatrucia s uporczywe biegunki, wymioty, nudno ci i
skurcze oł dka. Objawy s ju widoczne nawet po 30 min od spo ycia. Z reguły
objawy zanikaj po 3 - 4 dniach. Przy chronicznych zatruciach jest mo liwa indukcja
raka oł dka czy te przewodu pokarmowego [5]. W 1984 r., we Francji, około 10 000
osób zatruło si po spo yciu ska onych mi czaków [6]. Do grupy toksyn DSP zalicza
si kwas okadaikowy (OA) i jego pochodne - dinofysistoksyny (DTX1, DTX2,
DTX3), pektenotoksyny (PTX1, PTX2) oraz yessotoksyny (YTX's).
Dinofysiskotoksyny uszkadzaj równie w trob . ródłem toksyn DSP s glony
BIOTOKSYNY MORSKIE - WYST POWANIE I METODY ANALIZY
19
Dinophysis spp . oraz Prorocentrum . Metody wykrywania toksyn to MBA [15], HPLC
(fluorometric detector ), TLC, LC, LC-MS, LC–ion-spray MS, Elisa, testy fosfatazowe
(np. PP2A, Biosense) czy te testy cytotoksyczne. Badania mi dzylaboratoryjne LC-
MS wskazuj na t metod jako referencyjn przy oznaczaniu toksyn ASP i DSP [8].
AZP jest oddzieln , nowo sklasyfikowan grup toksyn, w której substancj
toksyczn jest kwas azaspirowy (AZA) i jego pochodne . Toksyna ta ma równie swoje
izomery, AZA2 do AZA5. Objawy przy zatruciu AZA s podobne do zatrucia DSP,
a wi c uporczywe biegunki, wymioty, nudno ci i skurcze oł dka. W listopadzie 1995
r. w Holandii 8 osób zachorowało po spo yciu hodowlanych omułków ( Mytilus edulis )
pochodz cych z Irlandii, z Killary Harbour [11]. Nast pne zatrucie AZA wyst piło
w nast pnym roku w Irlandii, równie po spo yciu omułków. Przypuszcza si , e
plankton (brudnica ) Protoceratum crissipes produkuje kwas azaspirowy [13]. Jak
dotychczas AZA's znajdowano jedynie w omułkach i ostrygach [9]. Do metod
wykrywania toksyn AZP mo na zaliczy : RBA, MBA, LC-MS, LC-MS-MS, HPLC z
detektorem fluorometrycznym, ELISA czy te testy czynno ciowe [10].
Toksyna powoduj ca amnezj – ASP (Amnestic Shellfish Poisoning)
Głównym zwi zkiem toksycznym jest kwas domoikowy i jego izomery. Po raz
pierwszy zdiagnozowano zatrucie kwasem domoikowym w Kanadzie w 1987 r.
w wyniku spo ycia omułków (blue mussels). Omułki zawierały do 790 ug DA/g (cały
omułek). W wyniku tego zatrucia 105 osób było hospitalizowanych, a 3 osoby zmarły.
Okrzemek Pseudonitzschia jest głównym jednokomórkowcem wytwarzaj cym kwas
domoikowy (DA) [2, 7]. Dopuszczalna zawarto DA w mi niach mał y to 20 mg/100
g mi sa. Objawy zatrucia wyst puj po 24 godz. od spo ycia przy łagodnym zatruciu i
od 0,5 do 6 godz. przy ostrym zatruciu. Objawy po spo yciu s podobne do choroby
Alzheimera. Nast puje krótkotrwała utrata pami ci (short term memory). Po inhalacji
aerozolu w postaci „mgiełki z wody morskiej”, podczas spaceru brzegiem morza, gdy
woda „kwitnie” mo e wyst pi dodatkowo skurcz oskrzeli. Przy lekkim zatruciu i u
konsumentów niemaj cych problemów z nerkami nast puje całkowite wyzdrowienie
ju po kilku dniach. Przy ostrym zatruciu, gdy organizm nie jest w stanie szybko
usun toksyny (DA), mo e wyst pi dodatkowo powa ne, trwałe uszkodzenie mózgu.
Metody wykrywania ASP w „owocach morza” to HPLC (metoda referencyjna), MBA,
Elisa, TLC, GC-MS, LC-MS czy te elektroforeza kapilarna. Test na myszach nale y
do metod AOAC (1990). Toksyn amnestyczn stwierdzano równie we
wn trzno ciach krabów (do 90 ug/g), mał y yletkowych (razor clams) czy te
sardynkach.
20
Mirosław M. Michalski
Toksyny powoduj ce zaburzenia nerwowe – NSP (Neurotic Shellfish Poisoning)
Aktywn neurotoksyn jest brewetoksyna i jej izomery. Objawy zatrucia to
podwójne widzenie, trudno ci w przełykaniu, dreszcze, mdło ci, biegunka,
odr twienie, sucho w ustach czy tez uporczywy kaszel przy wdychaniu mgiełki
morskiej zawieraj cej brewetoksyn (objawy astmopodobne). Zatrucia neurotoksyn
po spo yciu mi czaków najcz ciej wyst puj w Zatoce Meksyka skiej, Nowej
Zelandii i na wschodnim wybrze u Florydy. W Europie nie stwierdzono zatru po
spo yciu mał ska onych brewetoksyn . Jednak w Niemczech, Francji, Grecji,
Holandii, Portugalii i Hiszpanii wykryto obecno planktonu wytwarzaj cego t
toksyn . Za obecno NSP's odpowiadaj brudnice (dinoflagellate), a szczególnie glon
Gymnodinium breve (Karenia brevis) [7]. Brewetoksyna jest toksyczna równie dla
ryb. Jest to toksyna bezsmakowa, bezzapachowa, ciepłooporna, kwasooporna oraz
rozpuszczalna w tłuszczach (lipofilna) [3]. Brewetoksyn wykrywa si testem MBA,
testami biologicznymi na rybach Gambusia affinis (FBA), Elisa, TLC, LC-MS czy te
metodami radioimmunologicznymi.
Akty prawne dotycz ce gospodarki mał ami
Zasady wprowadzania do handlu mał s ci le okre lone prawem unijnym,
szczegółowo reguluj cym wszystkie etapy produkcji, od rodowiska hodowlanego,
hodowl , oczyszczanie a do limitów pozostało ci w tkankach mał przeznaczonych
do bezpo redniego spo ycia, jak i do przetwórstwa.
Aktem prawnym reguluj cym bezpiecze stwo ywno ciowe w odniesieniu do
mał jest Decyzja Komisji z dnia 15 marca 2002 r. (2002/225) ustanawiaj ca
szczegółowe zasady wykonania dyrektywy Rady 91/492/EWG w zakresie
najwy szego dopuszczalnego poziomu zawarto ci i metod analizy niektórych morskich
biotoksyn w mał ach, szkarłupniach, osłonicach i limakach morskich. Sekcja VII w
Rozporz dzeniu (WE) nr 853/2004 Parlamentu Europejskiego i Rady z dnia 29
kwietnia 2004 r. ustanawia szczególne przepisy dotycz ce higieny w odniesieniu do
ywno ci pochodzenia zwierz cego. Decyzja Komisji z 14 listopada 2003 r.
(2003/804/EC) dotyczy warunków zdrowotnych i wymaga certyfikacyjnych przy
imporcie mał , ich jaj, gamet przeznaczonych do rozmna ania, hodowli, tuczenia z
przeznaczeniem do spo ycia przez ludzi. Decyzja Komisji z dnia 15 marca 2002
r. (2002/226) ustanawia specjalne kontrole zdrowotne dotycz ce zbierania i
przetwarzania okre lonych mał dwuskorupowych o poziomie toksyny ASP ( Amnesic
Shellfish Poison ) przekraczaj cym limity okre lone w dyrektywie Rady 91/492/EWG
(notyfikowana jako dokument nr C(2002) 1009). Decyzja Komisji z dnia 18
stycznia1996 r. (96/77/EC) ustanawia warunki zbioru i przetwórstwa pewnych mał
dwuskorupkowych pochodz cych z obszarów, w których poziom PSP przekracza

Plik z chomika:

Inne pliki z tego folderu:

Inne foldery tego chomika:

Zgłoś jeśli naruszono regulamin