151305.pdf

Slajd 1

Badania immunologiczne

a diagnostyka rŇnicowa.

lek med Julia Kulczycka

Zakþad Immunopatologii AMG

2007r

Slajd 2

Skierowanie na badania immunologiczne

Materiaþ biologiczny

Slajd 3

Badania na obecnoĻę autoprzeciwciaþ, RF,

skþadowych dopeþniacza, immunoglobulin -

surowica:

1. Krew pobrana do probwki ána skrzepÑ w iloĻci

3-5 ml.

2. Transport Î do 2h w temperaturze pokojowej,

do 24h w temperaturze 4 C (surowica do 72h).

3. Przesy þ ka poczt Ģ - surowica w plastikowej

probwce lub fiolce typu áeppendorfÑ

dodatkowo zabezpieczona kopert Ģ ochronn Ģ ,

list priorytetowy, do 72h.

Slajd 4

Materiaþ biologiczny c.d.

Diagnostyka zaburzeıodpornoĻci typu komrkowego

- peþna krew pobrana na EDTA (min. 2 ml)

peþna krew/szpik pobrane na EDTA (min. 2 ml)

Phagotest/burtest

peþna krew pobrana na heparynħ (2 ml)

Przeciwciaþa przeciwpþytkowe

- surowica okoþo 3ml krwi ána skrzepÑ, oraz krew peþna pobrana

do prbwki z cytrynianem:

np. u osb dorosþych < 20 G/l pþytek Î 40 ml, 21-50 G/l Î 30 ml,

51-150 G/l Î 20 ml, > 150 G/l Î 10 ml.

(uwaga! Îwskazany jest kontakt z LIK).

Slajd 5

Materiaþ biologiczny c.d.

Oznaczanie krioglobulin:

- okoþo 10 ml krwi pobranej do probwki w

temperaturze 37 0 C - zestaw strzykawkowy lub

prŇniowy powinien ogrzany poprzez

umieszczony na okoþo 40 min w cieplarce o

temp. 37 0 C. BezpoĻrednio po pobraniu

surowicħ naleŇy dostarczyę do laboratorium

zachowujĢc temperaturħ 37 0 C.

- Zaleca siħ pobranie materiaþu

bezpoĻrednio w Laboratorium

Slajd 6

Materiaþ biologiczny c.d.

Oceny wczesnego antygenu CMV pp65:

2 ml krwi - jaþowa probwki z EDTA ( bezpoĻrednio po

pobraniu przesþaę do laboratorium)

Ocena subpopulacjilimfocytw:

2x2 ml krwi - probwka z EDTA ( bezpoĻrednio po pobraniu

przesþaę do laboratorium)

Oznaczanie HLA metodĢ serologicznĢ:

6ml krwi - probwka z heparynĢ ( bezpoĻrednio po pobraniu

przesþaę do laboratorium)

Oznaczanie HLA metodĢ genetycznĢ (analiza DNA):

6 ml krwi - probwka z EDTA (maksymalny czas transportu

24 godzin)

Immunofenotypizacja

Slajd 7

Materiaþ biologiczny c.d.

Mocz dobowy (oznaczanie biaþek specyficznych):

Mocz zbierany przez 24 godziny do naczynia ze Ļrodkiem

konserwujĢcym (np. tymol) i przechowywany w temperaturze

4-8 C, po wymieszaniu przesþany do laboratorium w

probwce (5 ml).

Pþyn mzgowo-rdzeniowy lub stawowy:

2 ml w jaþowej probwce (maksymalny czas transportu - 24h)

Materiaþ biologiczny c.d.

Slajd 8

Tkanki

1. Badania immunohistohemiczne - bioptaty narzĢdw

miĢŇszowych (wĢtroba, nerka) lub wycinki skrno-

miħĻniowe.

2. Transport Î do 24h, w temperaturze 4 C, w Ļ rodowisku

0,9% NaCl (zalecane jest umieszczenie bioptatu na bibu þ ce

nas Ģ czonej sol Ģ fizjologiczn Ģ , a nie bezpo Ļ rednio w

pojemniku z 0,9% NaCl).

Nie zamraŇaę! Nie utrwalaę!

Slajd 9

Badania w diagnostyce immunologicznej

- Metody immunohistochemiczne:

1. Metody immunofluorescencyjne (poĻrednia,

bezpoĻrednia)

2. Techniki immunoenzymatyczne (ELISA)

3. Techniki z wykorzystaniem znakowanych

ligandw (zþoto koloidalne)

- Metody serologiczne (nefelometryczna, inne)

- Metody typu Dot blot, Western blot

- Cytometria przepþywowa

- RT-PCR, PCR.

Slajd 10

Metoda immunofluorescencyjna

Û Metoda immunomorfologiczna, pozwalajĢcĢ okreĻlię

miejsce wiĢzania antygenu z przeciwciaþem in situ w

badanej tkance lub w komrkach.

Û Zastosowanie:

badania immunohistochemiczne - identyfikacja

antygenw (wirusologia, patogeneza chorb o podþoŇu

autoimmunizacyjnym), organelli komrkowych,

receptorw, ligandw, miejsc syntezy hormonw itp.

Testy immunoenzymatyczne

Slajd 11

Û Metoda ELISA - wykrywanie okreĻlonych biaþek w badanym materiale z

uŇyciem przeciwciaþ poliklonalnych lub monoklonalnych sprzħŇonych z

odpowiednim enzymem.

Û Szerokie zastosowanie w diagnostyce (choroby z autoagresji, serologia infekcji

wirusowych, grzybiczych i bakteryjnych, alergie) .

Û Badania jakoĻciowe i iloĻciowe.

Û Wysoka specyficznoĻę i czuþoĻę.

Û Biochemicznie scharakteryzowane antygeny.

Û ýatwe i wygodne przeprowadzenie testu.

Û DuŇa powtarzalnoĻę wynikw.

Metody weryfikacji stosowane w

diagnostyce immunologicznej.

Slajd 12

JakoĻciowe oznaczanie in-vitro ludzkich przeciwciaþ

skierowanych przeciwko antygenom wþasnym,

bakteryjnym lub wirusowym.

¤ Western blot Îinkubacja surowicy pacjenta z

paskami membrany z ekstraktem antygenw

poddanym rozdziaþowi elektroforetycznemu (do

kilkudziesiħciu rŇnych antygenw na pasku).

¤ Dot blot Î kombinacja testu krĢŇkowego i Western

blot. Szybka detekcja specyficznych przeciwciaþ w

surowicy pacjenta. Do badania jest wykorzystywana

membrana z naniesionym substratem antygenowym -

jeden lub kilka antygenw naþoŇonych w okreĻlonej

kombinacji (bez rozdziaþu elektroforetycznego).

Slajd 13

Znaczenie kliniczne miana przeciwciaþ

Grupa I

Grupa II

istotne diagnostycznie od maþych

rozczeıczeı surowicy:

istotne diagnostycznie od

wyŇszych rozczeıczeı surowicy:

1:5 - WiħkszoĻę przeciwciaþ

narzĢdowo-swoistych.

1:2 - przeciwciaþa przeciw

wyspom trzustki

1:20 - AMA, ASMA, SMA i td.

1:40 - ANA, ANCA .

1:80 Î ANA-HEp.

Slajd 14

WartoĻci referencyjne

Zakres wartoĻci normalnych

(referencyjnych), obejmujĢcych 95%

wynikw stwierdzanych u osb zdrowych

niezaleŇnie od metody badaı.

Norma - pojħcie statystyczne.

Slajd 15

Znaczenie badaı

immunologicznych

Plik z chomika:

Inne pliki z tego folderu:

Inne foldery tego chomika: